РЕЗЮМЕ. Ефективне та відтворюване введення міміків мікроРНК є надзвичайно важливим для функціональних досліджень регуляції генів за участю мікроРНК у ракових клітинах. Однак, результати трансфекції значною мірою залежать від експериментальних параметрів, зокрема від часу після трансфекції та співвідношення між міміками мікроРНК і реагентами для трансфекції. Ми оптимізували умови трансфекції міміків miR-141-3p у клітинній лінії раку молочної залози людини MCF-7, оцінивши три часові точки після трансфекції (24, 48 та 72 години) та три співвідношення міміків міРНК:ліпофектамін RNAiMAX (6:3, 6:4 та 6:5). Ефективність трансфекції оцінювали за допомогою кількісної РТ-кПЛР методом шпильки для miR-141-3p. Клітинні реакції оцінювали шляхом вимірювання щільності клітин та аналізу експресії встановлених цільових мРНК miR-141 (EGFR, HMGB1 та KLF12). Експресія miR-141-3p була значно підвищеною в клітинах, трансфікованих міміком, порівняно з імітаційним контролем та пустим контролем у всі часові точки, демонструючи залежний від часу характер із максимальною експресією через 48 годин після трансфекції. Експресія цільових мРНК демонструвала відповідні часові зміни, причому найбільший ступінь негативної регуляції спостерігався через 48 годин. Оптимізація співвідношення міміків міРНК:ліпофектаміну виявила прогресивне підвищення експресії miR-141-3p при збільшенні кількості ліпофектаміну, причому співвідношення 6:5 забезпечувало найвищий рівень надмірної експресії міРНК та найвиразнішу негативну регуляцію цільової мРНК, що відповідає регуляторній активності, опосередкованій міРНК. Аналіз щільності клітин вказав на помірне інгібування росту, залежне від співвідношення, при вищих кількостях ліпофектаміну, без ознак явної цитотоксичності. Час після трансфекції та співвідношення міміків міРНК:ліпофектаміну є критичними визначальними факторами ефективності трансфекції та подальших регуляторних ефектів у клітинах MCF-7. Визначені тут оптимізовані умови забезпечують надійну основу для подальших функціональних досліджень miR-141 раку молочної залози.
Ключові слова: miR-141-3p; трансфекція міміків міРНК; ліпофектамін RNAiMAX; клітини MCF-7; рак молочної залози; оптимізація трансфекції
