Isolating and confirming the Mudr­inserted flanking sequences of maize

РЕЗЮМЕ. MuDR проявляет наивысшую транспозиционную активность и частоту инерционного мутагенеза в семействе Mutator (Mu). Если изолировать вставленные специальные фланкирующие последовательности (MuDRFs), это будет критически важным для использования элемент­опосредованных мутантов. Система MuDR­TAIL­PCR была создана и оптимизирована с использованием комбинации MuDR­TIR­вложенных специфических праймеров и 12 случайных вырожденных праймеров, модифицированной реакционной системы и методики и мутантных ДНК­матриц 87 генотипов из семейств M₂ или M_{2: 3}, созданных в результате скрещивания линии W22::Mu (родительский донор активных MuDR) из популяции UniformMu с линией Zong31 (родительский реципиент). В настоящей работе MuDR­TAIL­PCR получили 129 различных MuDRFs, что составляет 86,6 % общих мутант­специфических полос в агарозном геле. Кроме того, подтверждено аутентичность амплификации незарезервированных фланкирующих последовательностей, которые составляли 65,12 % общих MuDRFs, а 88,00 % незарезервированных MuDRFs встраивались в гены. Эти результаты свидетельствуют о том, что созданная нами система MuDR­TAIL­PCR может быть использована для специфического выделения MuDRFs.

MuDR проявляє найвищу транспозиційну активність та частоту інcерційного мутагенезу в родині Mutator (Mu). Якщо ізолювати вставлені специфічні флангові послідовності (MuDRFs), це буде критично важливим для використання елемент­опосередкованих мутантів. Система MuDR­TAIL­PCR була створена і оптимізована з використанням комбінації MuDR­TIR­вкладених специфічних праймерів та 12 випадкових вироджених праймерів, модифікованої реакційної системи і методики та мутантних ДНК­матриць 87 генотипів з родин M₂ або M_2:3, створених внаслідок схрещування лінії W22::Mu (батьківський донор активних MuDR) з популяції UniformMu з лінією Zong31 (батьківський реципієнт). В даній роботі MuDR­TAIL­PCR набули 129 різних MuDRFs, що складає 86,6 % загальних мутант­специфічних смуг в агарозному гелі. Крім того, підтверджено аутентичність ампліфікації незарезервованих фланкуючих послідовностей. Ампліфіковані незарезервовані фланкуючі послідовності становили 65,12 % загальних MuDRFs, а 88,00 % незарезервованих MuDRFs вбудовувались в гени. Ці результати свідчать, що створена нами система MuDR­TAIL­PCR може бути використана для специфічного виділення MuDRFs.

Ключові слова: MuDR­TAIL­PCR, MuDR transposon, MuDR­insertion mutant library, Zea mays L.