ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДОВ ТРАНСФЕКЦИИ КЛЕТОК Huh-7 И VERO: СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ
РЕЗЮМЕ. Наличие эффективного протокола трансфекции является первым условием успешных исследований по переносу генов в клетки млекопитающих, что достигается экспериментально для каждого конкретного типа клеток. Здесь мы приводим данные сравнительного исследования по оптимизации условий трансфекции клеток Huh-7 и Vero с помощью электропорации и химическими методами. Для двух химических соединений, jetPEI™ и Lipofectamine™ 2000, были оптимизированы сочетания различных клеток, соотношения ДНК/реагент и общие объемы трансфекции. Кроме того, для улучшения эффективности электропорации было изучено влияние силы электрического поля и длины импульса. Трансфекция клеток с помощью вектора pEGFP-N1, определение экспрессии GFP с помощью FACS и флюоресцентная микроскопия были использованы для оценки эффективности трансфекции. В оптимизированных протоколах достигалась трансфекция на уровне 63.73 ± 2.36 и 73.9 ± 1.6 % в клетках Huh-7 и Vero соответственно, в то время как максимальный уровень трансфекции с помощью jetPEI™ составлял 14.2 ± 0.69 и 28 ± 1.11 % для тех же клеток. Охлаждение клеток после трансфекции не улучшало эффективность электротрансфекции клеток Huh-7. В обеих клеточных линиях электропорация позволила достичь более высокого уровня трансфекции по сравнению с использованием химических реагентов. Представленный протокол может быть пригодным для большинства экспериментальных манипуляций, которые требуют высокого уровня трансфекции исследуемых клеточных линий.
Ключові слова: transfection efficiency, Huh-7, Vero, electroporation, optimization
