High frequency genetic transformation of Cichorium intybus L. using nptII gene as a selective marker

Matvieieva N., Shachovsky A., Kvasko O., Kuchuk N.

Оригінальна работа 

РЕЗЮМЕ. Cichorium intybus L. – растения, которые выращи-ваются как для использования в качестве салатной культуры (листовая форма), так и для производства заменителя кофе (корневая форма). В то же время эти растения могут использоваться в биотехнологиях для синтеза фармацевтических белков. В работе приведены данные, свидетельствующие о возможности генетической трансформации растений цикория с высокой эффективностью при помощи гена неомицинфосфотрансферазы II как селективного маркера. Agrobacterium rhizogenes- или A. tumefaciens-опосредованная трансформация были использованы для получения трансгенных растений или «бородатых» корней цикория. Плазмиды, исполь-зованные для трансформации, имели целевой ген интерферона человека ifn-α2b, сшитый ген антигенов ESAT6 и Ag85B Mycobacterium tuberculosis esxA::fbpB^ΔTMD и ген теломеразной обратной транскриптазы человека hTert. Частота образования трансгенных корней или регенерации побегов варьировала в пределах от 5,9–42,3 до 10–86 % после A. rhizogenes- или A. tumefaciens-опосредованной трансформации соответственно. Частота трансформации зависела как от типа экспланта (корни или семядоли), так и от использованного вектора. Использование гена nptII в качестве селективного оказалось предпочтительным по сравнению с использованием гена bar. В этом случае частота получения трансгенных расте-ний или «бородатых» корней была значительно выше и составила до 86 %.

Cichorium intybus L. – рослини, які вирощуються як для використання в якості салатної культури (листова форма), так і для виробництва замінника кави (коренева форма). У той же час ці рослини можуть використовуватися в біотехнологіях для синтезу фармацевтичних білків. У роботі наведені дані, що свідчать про можливість генетичної трансформації рослин цикорію з високою ефективністю при використанні гена неоміцинфосфотрансферази II як селективного маркера. Agrobacterium rhizogenes- або A. tumefaciens-опосередкована трансформація були використані для отримання трансгенних рослин або «бородатих» коріння цикорію. Плазміди, використані для трансформації, мали цільової ген інтерферону людини ifn-α2b, зшитий ген антигенів ESAT6 і Ag85B Mycobacterium tuberculosis esxA :: fbpBΔTMD і ген теломеразной зворотної транскриптази людини hTert. Частота освіти трансгенних коренів або регенерації пагонів варіювала в межах від 5,9–42,3 до 10–86% після A. rhizogenes- або A. tumefaciens-опосередкованої трансформації відповідно. Частота трансформації залежала як від типу експлантів (коріння або сім'ядолі), так і від використаного вектора. Використання гена nptII в якості селективного виявилося кращим у порівнянні з використанням гена bar. У цьому випадку частота отримання трансгенних рослин або «бородатих» коренів була значно вищою і становила до 86%.

Ключові слова: Cichorium intybus L., Agrobacterium-mediated transformation, nptII, bar, human ifn-α2b gene, esxA::fbpB^ΔTMD gene
Cichorium intybus L., Agrobacterium-опосредованная трансформация, nptII, bar, ген интерферона α2b человека ifn-α2b, esxA::fbpB^ΔTMD ген

Цитологія і генетика 2015, том 49, № 4, C. 11-16

E-mail: joyna56 gmail.com

Matvieieva N., Shachovsky A., Kvasko O., Kuchuk N. High frequency genetic transformation of Cichorium intybus L. using nptII gene as a selective marker, Цитологія і генетика., 2015, том 49, № 4, C. 11-16.

В "Cytology and Genetics". Якщо тільки можливо, цитуйте статтю по нашій англомовній версії:
N. Matvieieva, A. Shakhovsky, O. Kvasko, N. Kuchuk High frequency genetic transformation of Cichorium intybus L. using nptll gene as a selective marker, Cytol Genet., 2015, vol. 49, no. 4, pp. 220–225
DOI: 10.3103/S0095452715040052