Цитологія і генетика 2019, том 53, № 4, 70-71
Cytology and Genetics 2019, том 53, № 4, 325–329, doi: https://www.doi.org/10.3103/S0095452719040121

Molecular cloning and functional characterization of mouse innate immune sensor RIG

Tangjie Zhang, Saumendra N. Sarkar, Jianzhong Zhu

  1. College Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, P. R. China
  2. School of Medicine, University of Pittsburgh, Pittsburgh, USA, 15232

РЕЗЮМЕ. Вроджений імунітет функціонує як перша лінія захисту від інфекцій, в якій серії рецепторів вродженого імунітету виступають у якості посередника. RIG-I-подібні рецептори (RLR) розпізнають нуклеїнові кислоти цитозолю, переважно з вірусів, запускають виробництво інтерферону типу І (ІФН І), а, отже, відіграють важливу роль в імунітеті проти вірусів. У цій роботі ми клонували кДНК RIG-I миші (мRIG-I) у вектор pENTR, використовуючи технологію TOPO-клонування, і трансфектували ген мRIG-I з FLAG-тагом з вектору pENTR на цільовий вектор pLenti. Експресію мRIG-I у трансфектованих клітинах було виявлено за допомогою іммуноблотингу, використовуючи антитіла – анти-FLAG та анти-RIG-I. Трансфектований мRIG-I виявився здатним до індукції транскрипції інтерферон-стимульованого гену, що регулює наступні ланки сигнальних каскадів, а також експресію білків.

Ключові слова: Gateway-клонування; інтерферон-стимульований ген (ІСГ); RIG-I мишей; мікроклонування в TOPO-системі

Цитологія і генетика
2019, том 53, № 4, 70-71

Current Issue
Cytology and Genetics
2019, том 53, № 4, 325–329,
doi: 10.3103/S0095452719040121

Повний текст та додаткові матеріали

Цитована література

1. O’Neill, L.A., Immunology. After the Toll rush, Science, 2004, vol. 303, pp. 1481–1482.

2. Medzhitov, R., Approaching the asymptote: 20 years later, Immunity, 2009, vol. 30, pp. 766–775.

3. Schlee, M., Master sensors of pathogenic RNA—RIG-I like receptors, Immunobiology, 2013, vol. 218, pp. 1322–1335.

4. Hornung, V., Ellegast, J., Kim, S., Brzozka, K., Jung, A., Kato, H., Poeck, H., Akira, S., Conzelmann, K.K., Schlee, M., Endres, S., and Hartmann, G., 5'-triphosphate RNA is the ligand for RIG-I, Science, 2006, vol. 314, pp. 994–997.

5. Bowie, A.G. and Fitzgerald, K.A., RIG-I: tri-ing to discriminate between self and non-self RNA, Trends Immunol., 2007, vol. 28, pp. 147–150.

6. Zhu, J., Ghosh, A., and Sarkar, S.N., OASL—a new player in controlling antiviral innate immunity, Curr. Opin. Virol., 2015, vol. 12, pp. 15–19.

7. Yoneyama, M., Kikuchi, M., Natsukawa, T., Shinobu, N., Imaizumi, T., Miyagishi, M., Taira, K., Akira, S., and Fujita, T., The RNA helicase RIG-I has an essential function in double-stranded RNA-induced innate antiviral responses, Nat. Immunol., 2004, vol. 5, pp. 730–737.

8. Sumpter, R., Jr., Loo, Y.M., Foy, E., Li, K., Yoneyama, M., Fujita, T., Lemon, S.M., and Gale, M., Jr., Regulating intracellular antiviral defense and permissiveness to hepatitis C virus RNA replication through a cellular RNA helicase, RIG-I, J. Virol., 2005, vol. 79, pp. 2689–2699.

9. Kato, H., Takeuchi, O., Sato, S., Yoneyama, M., Yamamoto, M., Matsui, K., Uematsu, S., Jung, A., Kawai, T., Ishii, K.J., Yamaguchi, O., Otsu, K., Tsujimura, T., Koh, C.S., Reis e Sousa, C., Matsuura, Y., Fujita, T., and Akira, S., Differential roles of MDA5 and RIG-I helicases in the recognition of RNA viruses, Nature, 2006, vol. 441, pp. 101–105.

10. Kell, A.M. and Gale, M., Jr., RIG-I in RNA virus recognition, Virology, 2015, vol. 479-80, pp. 110–121.

11. Wu, B. and Hur, S., How RIG-I like receptors activate MAVS, Curr. Opin. Virol., 2015, vol. 12, pp. 91–98.

12. Zhu, J., Zhang, Y., Ghosh, A., Cuevas, R.A., Forero, A., Dhar, J., Ibsen, M.S., Schmid-Burgk, J.L., Schmidt, T., Ganapathiraju, M.K., Fujita, T., Hartmann, R., Barik, S., Hornung, V., Coyne, C.B., and Sarkar, S.N., Antiviral activity of human OASL protein is mediated by enhancing signaling of the RIG-I RNA sensor, Immunity, 2014, vol. 40, pp. 936–948.

13. Campeau, E., Ruhl, V.E., Rodier, F., Smith, C.L., Rahmberg, B.L., Fuss, J.O., Campisi, J., Yaswen, P., Cooper, P.K., and Kaufman, P.D., A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells, PLoS One, 2009, vol. 4, no. 8. e6529.

14. Esposito, D., Garvey, L.A., and Chakiath, C.S., Gateway cloning for protein expression, Methods Mol. Biol., 2009, vol. 498, pp. 31–54.

15. Meerbrey, K.L., Hu, G., Kessler, J.D., Roarty, K., Li, M.Z., Fang, J.E., Herschkowitz, J.I., Burrows, A.E., Ciccia, A., Sun, T., Schmitt, E.M., Bernardi, R.J., Fu, X., Bland, C.S., Cooper, T.A., Schiff, R., Rosen, J.M., Westbrook, T.F., and Elledge, S.J., The pINDUCER lentiviral toolkit for inducible RNA interference in vitro and in vivo, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2011, vol. 108, pp. 3665–3670.