С использованием экспрессионной системы E. coli успешно создана слитая конструкция бок-о-бок, проведены экспрессия, очистка и дана функцио нальная характеристика папаиноподобной цистеин-протеиназы и ингибитора цистеинпротеиназы арабидопсиса без нарушения роста рекомбинантных бактерий. Очищенные продукты двух различных слитых конструкций, обозначенные как "R1: H2N-maltose binding protein-CPI-CP-COOH and R2: H2N-maltose binding protein-CP-CPI-COOH", показали обратные ферментативные/ингибирующие активности in vitro. Анализ конструкций с использованием компьютерных методов показал, что расположение пары CP/CPI в слитых конструкциях является важным критерием правильной третичной организации, структурного фолдинга и функциональных свойств. С-терминально расположенные молекулы могут быть активными структурами в каждой слитой конструкции. Результаты работы можно использовать в белковой инженерии для создания новых переключаемых экспрессионных систем.
Ключові слова: Cysteine proteinase, Cystatin, Fusion protein, Papain