Головна Контакти Архів   Тематика журналу Підписка До уваги авторів Редколегія Дестопна версія

Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study

Hashemi A., Roohvand F., Ghahremani M.H., Aghasadeghi M.R., Vahabpour R., Motevali F., Memarnejadian A.

Оригінальна работа 

ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДОВ ТРАНСФЕКЦИИ КЛЕТОК Huh-7 И VERO: СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ

РЕЗЮМЕ. Наличие эффективного протокола трансфекции является первым условием успешных исследований по переносу генов в клетки млекопитающих, что достигается экспериментально для каждого конкретного типа клеток. Здесь мы приводим данные сравнительного исследования по оптимизации условий трансфекции клеток Huh-7 и Vero с помощью электропорации и химическими методами. Для двух химических соединений, jetPEI™ и Lipofectamine™ 2000, были оптимизированы сочетания различных клеток, соотношения ДНК/реагент и общие объемы трансфекции. Кроме того, для улучшения эффективности электропорации было изучено влияние силы электрического поля и длины импульса. Трансфекция клеток с помощью вектора pEGFP-N1, определение экспрессии GFP с помощью FACS и флюоресцентная микроскопия были использованы для оценки эффективности трансфекции. В оптимизированных протоколах достигалась трансфекция на уровне 63.73 ± 2.36 и 73.9 ± 1.6 % в клетках Huh-7 и Vero соответственно, в то время как максимальный уровень трансфекции с помощью jetPEI™ составлял 14.2 ± 0.69 и 28 ± 1.11 % для тех же клеток. Охлаждение клеток после трансфекции не улучшало эффективность электротрансфекции клеток Huh-7. В обеих клеточных линиях электропорация позволила достичь более высокого уровня трансфекции по сравнению с использованием химических реагентов. Представленный протокол может быть пригодным для большинства экспериментальных манипуляций, которые требуют высокого уровня трансфекции исследуемых клеточных линий.

Ключові слова: transfection efficiency, Huh-7, Vero, electroporation, optimization

Цитологія і генетика 2012, том 46, № 6, C. 19-27

• Hepatitis and AIDS Department, Pasteur Institute of Iran, Tehran
• NRGB, Pasteur institute of Iran, Pasteur Ave., Tehran
• Department of Pharmacology and Toxicology, Faculty of Pharmacy, Tehran University of Medical sciences

E-mail: rfarzin pasteur.ac.ir

Hashemi A., Roohvand F., Ghahremani M.H., Aghasadeghi M.R., Vahabpour R., Motevali F., Memarnejadian A. Optimization of transfection methods for Huh­7 and Vero cells: a comparative study, Цитологія і генетика., 2012, том 46, № 6, C. 19-27.

В "Cytology and Genetics". Якщо тільки можливо, цитуйте статтю по нашій англомовній версії:
A. Hashemi, F. Roohvand, M. H. Ghahremani, M. R. Aghasadeghi, R. Vahabpour, F. Motevali, A. Memarnejadian Optimization of transfection methods for Huh-7 and Vero cells: A comparative study, Cytol Genet., 2012, vol. 46, no. 6, pp. 347-353
DOI: 10.3103/S0095452712060035