Характеристика панели одноцепочечных антител мыши против рекомбинантного интерферона β1b человека

Павлова М.В., Николаев Ю.С., Иродов Д.М., Окунев О.В., Кордюм В.А., Гильчук П.В.

Оригінальна работа 

[Free Full Text (pdf)]

Из иммунной и неиммунной комбинаторных библиотек кДНК вариабельных генов иммуноглобулинов мыши получена панель одноцепочечных антител (ScFv’s – single-chain Fv-antibodies) против рекомбинантного интерферона β1b человека (rhIFN-β1b), которые были экспрессированы в клетках Escherichia coli. Для изолированных из иммунной библиотеки продуцентов показана разница в уровнях продукции ScFv’s в периплазму и среду для культивирования, а также стабильность экспрессии при пересевах и хранении. После секвенирования целевой ДНК было проведено множественное выравнивание и структурный анализ последовательностей ScFv’s с разной первичной структурой, в результате чего были выявлены существенные отличия как в антиген-связывающих (CDR), так и в каркасных (FR) участках их вариабельных доменов. Методами ELISA и вестерн-блоттинга показана специфичность взаимодействия полученных из иммунной библиотеки ScFv’s как с нативным, так и с денатурированным rhIFN-β1b, а также их стабильность при хранении. Для каждого представителя панели ScFv’s были определены константы аффинности, которые находились в диапазоне от 1,9610 ^-8 до 1,6910 ^{- 9} М.

Ключові слова: библиотека кДНК, ScFv’s, Escherichia coli, rhIFN-β1b, специфичность, аффинность

Цитологія і генетика 2008, том 42, № 4, C. 3-11

• Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Украина
• Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев

E-mail: mailto:gilchuk ukr.net

Павлова М.В., Николаев Ю.С., Иродов Д.М., Окунев О.В., Кордюм В.А., Гильчук П.В. Характеристика панели одноцепочечных антител мыши против рекомбинантного интерферона β1b человека, Цитологія і генетика., 2008, том 42, № 4, C. 3-11.