Изучение влияния lox-сайтов Cre-lox системы рекомбинации на экспрессию беспромоторного bar гена в трансгенных растениях

Щербак Н.Л., Белокурова В.Б., Гецко И.О., Комарницкий И.К., Кучук Н.В.

Оригінальна работа 

[Free Full Text (pdf)]

Показано, что при размещении lox-сайта в генетических конструкциях в непосредственной близости от правой границы Т-ДНК (RB – lox – bar –) происходит стабильная экспрессия следующего за lox-сайтом беспромоторного bar гена. Генетические конструкции, которые были использованы в работе, содержали также ген неомицинфосфотрансферазы II (npt II) под контролем nos промотора. Трансформированные растения Nicotiana tabacum и N. africana были отобраны по способности расти на среде, содержащей канамицин, а затем протестированы на селективной среде, содержащей фосфинотрицин. У 80 % трансгенных растений, отобранных по устойчивости к канамицину, экспрессия bar гена происходила на таком же уровне, как и у растений, трансформированных конструкциями, в которых bar ген находится под сильным конститутивным промотором. При использовании конструкции без lox-сайта, в которой беспромоторный bar ген находится возле правой границы Т-ДНК (RB – bar –), либо конструкций, в которых lox-сайт и беспромоторный bar ген расположены в середине конструкции (– lox – bar –), частота РРТ-устойчивых растений составила не более 4,5 %. Анализ с помощью ПЦР не выявил возможных тандемных повторов или рекомбинации, в результате которых беспромоторный bar ген мог оказаться под контролем промотора, находящегося в плазмиде. При встраивании nos-терминатора в вектор между lox-сайтом и правым бордером частота РРТ-устойчивых трансгенных растений не изменилась.

Цитологія і генетика 2006, том 40, № 1, C. 3-9

Щербак Н.Л., Белокурова В.Б., Гецко И.О., Комарницкий И.К., Кучук Н.В. Изучение влияния lox-сайтов Cre-lox системы рекомбинации на экспрессию беспромоторного bar гена в трансгенных растениях, Цитологія і генетика., 2006, том 40, № 1, C. 3-9.