Розробка біотехнологічних підходів для видів із родини бобових (Fabaceae)

Перший клітинний поділ ізольованих протопластів мезофілу листків гороху після електропорації

Розроблено спосіб виділення та культивування мезофільних протопластів люцерни мінливої (Medicago varia L.) та північної (M. borealis L.), конюшини лугової (Trifolium pratense L.), гороху посівного (Pisum sativum L.), люпину вузьколистого (Lupinus angustifolius L.), гороху голубиного (Cajanus cajan L.) та сої культурної (Glycine max L.). Використовуючи для трансформації “shooty” мутант A.tumefaciens pGV2206 отримано високорегенераційні лінії гороху та люцерни посівної (M. sativa L.). Розроблено методики трансформації ліній гороху, люцерни та сої за допомогою A.tumefaciens, електропорації протопластів та бомбардування мікрочастинками золота. За допомогою агробактеріальної трансформації отримано трансгенні рослини гороху, що містять гени Ac, nptII, Ds-елемент та gus; трансгенні рослини люцерни (M. lupuline L.), що містять ген nptII. Використовуючи метод електропорації протопластів отримано трансгенні клітинні лінії та рослини гороху, що містять гени Ac, nptII, Ds-елемент та gus; трансгенні рослини люцерни (M. borealis L.) та клітинні лінії сої, що містять ген nptII. За допомогою методу бомбардування мікрочастинками золота отримано трансгенні рослини гороху, що містять гени nptII та gus. Стабільна інтеграція перенесених генів в геном отриманих клітинних ліній та рослин доведена за допомогою кількох молекулярно-біологічних та біохімічних методів: ПЛР, блотинг-гібридизації за Саузерном, NPT II ELISA, тесту на GUS-активність та визначення активності NPT. Перенесені в геном гороху гени Ac та npt II стабільно успадковуються та експресуються в наступних поколіннях.