Разработка биотехнологических подходов для видов из семейства бобовых (Fabaceae)

Первое клеточное деление изолированных протопластов мезофила листов гороха после электропорации

Разработан способ выделения и культивирование мезофильных протопластов люцерны непостоянной (Medicago varia L.) и северной (M. borealis L.), клевера лугового (Trifolium pratense L.), гороха посевного (Pisum sativum L.), люпина узколистого (Lupinus angustifolius L.), гороха голубиного (Cajanus cajan L.) и сои культурной (Glycine max L.). Используя для трансформации “shooty” мутант A.tumefaciens pGV2206 получено хорошо регенерирующие линии гороха и люцерны посевной (M. sativa L.). Разработана методики трансформации линий гороха, люцерны и сои с помощью A.tumefaciens, электропорации протопластов и бомбардировкой микрочастицами золота. С помощью агробактериальной трансформации получены трансгенные растения гороха, которые содержат гены Ac, nptII, Ds-Элемент и gus; трансгенные растения люцерны (M. lupuline L.), что содержат ген nptII. Используя метод электропорации протопластов получены трансгенные клеточные линии и растения гороха, которые содержат гены Ac, nptII, Ds-Элемент и gus; трансгенные растения люцерны (M. borealis L.) и клеточные линии сои, которые содержат ген nptII. С помощью метода бомбардировки микрочастицами золота получены трансгенные растения гороха, которые содержат гены nptII и gus. Стабильная интеграция перенесенных генов в геном полученных клеточных линий и растений доказана с помощью нескольких молекулярно-биологических и биохимических методов: ПЦР, блотинг-гибридизации по Саузерну, NPT II ELISA, теста на GUS-Активность и определения активности NPT. Перенесенные в геном гороха гены Ac и npt II стабильно наследуются и экспресуются в последующих поеолениях.