Павлова М.В., Гільчук П.В., Похоленко Я.О., Ніколаєв Ю.С., Кордюм В.А.

Створення та характеристика імунної комбінаторної бібліотеки кднк варіабельних генів імуноглобулінів миші

Цитология и генетика 2008, том 42, N 2, 10-15

Была сконструирована комбинаторная библиотека кДНК вариабельных генов иммуноглобулинов мышей, иммунизированных рекомбинантным интерфероном β1b человека (rhIFN-β1b). Для этого амплифицированную из спленоцитов кДНК вариабельных генов тяжелых (V_H) и легких (V_L) цепей иммуноглобулинов объединяли линкерной ДНК в составе последовательностей одноцепочечных антител – ScFv’s (single-chain Fv-antibodies). Полученный пул ScFv-ДНК был заклонирован в фагемидный вектор и использован для трансформации клеток Escherichia coli. С использованием метода фагового дисплея отобраны бактериальные клоны, которые продуцируют специфические к rhIFN-β1b одноцепочечные антитела. В работе определены такие характеристики созданной библиотеки, как представленность, функциональный размер, а также исходное разнообразие последовательностей ScFv-ДНК. Продемонстрирована высокая специфичность взаимодействия ScFv, выделенных с помощью фагового дисплея, с rhIFN-β1b.

Ключевые слова: комбинаторная библиотека кДНК, фаговый дисплей, ScFv’s E. coli, rhIFN-β1b